DD-PCR. DifferentialDisplayPolymeraseChainReaction

서로 다른 시스템에서 발현이 유도된 mRNA를 역전사한 후 PCR반응으로 증폭하고, GelElectrophoresis를 통하여 분획한 다음 그 결과를 비교하여, 두 시스템에서의 발현양이 다른 유전자들을 동정해 내는 MolecularBiology실험방법

DD-PCR은 두 시스템에서 다르게 발현되는 유전자들을 클로닝하는 목적으로 많이 이용되어 왔으나, 세포에 어떤 유전자를 발현시켰을 때 유전학적으로 이보다 downstream에서 작용하는 유전자들을 확인함으로써, 원래 유전자의 기능을 파악하는 목적으로도 활용된다.

장점

• 매우적은 샘플 RNA농도

단점

• FalsePositive

상대적으로 저렴한 방법으로 간단히 이용할수 있는 기술로 많이 애용되어 왔다. 결과데이터가 정량적이라고 하기보다는 정성적이며, MicroArray나, SAGE 데이터에 비해 에러확률이 좀 높은 특징이 있다.

예전엔, FalsePositive가 많은 문제가 있었으나, 다음기술향상으로 많이 나아졌다.

• optimizing primer composition

• increasing PCR primer annealing temp.

• DNAase treatement of RNA prior
• use of nondenaturing gels

• use of RestrictionEnzyme digestion of ds cDNA, followed by ligation of an adapter to mediate selective PCR of the extreme 3' ends of the fragmented cDNAs

관련기업

• CuraGen

• DigitalGeneTechnologies

• DisplaySystemsBiotech