DD-PCR. DifferentialDisplayPolymeraseChainReaction
서로 다른 시스템에서 발현이 유도된 mRNA를 역전사한 후 PCR반응으로 증폭하고, GelElectrophoresis를 통하여 분획한 다음 그 결과를 비교하여, 두 시스템에서의 발현양이 다른 유전자들을 동정해 내는 MolecularBiology실험방법
DD-PCR은 두 시스템에서 다르게 발현되는 유전자들을 클로닝하는 목적으로 많이 이용되어 왔으나, 세포에 어떤 유전자를 발현시켰을 때 유전학적으로 이보다 downstream에서 작용하는 유전자들을 확인함으로써, 원래 유전자의 기능을 파악하는 목적으로도 활용된다.
장점
매우적은 샘플 RNA농도
단점
상대적으로 저렴한 방법으로 간단히 이용할수 있는 기술로 많이 애용되어 왔다. 결과데이터가 정량적이라고 하기보다는 정성적이며, MicroArray나, SAGE 데이터에 비해 에러확률이 좀 높은 특징이 있다.
예전엔, FalsePositive가 많은 문제가 있었으나, 다음기술향상으로 많이 나아졌다.
- optimizing primer composition
increasing PCR primer annealing temp.
- DNAase treatement of RNA prior
- use of nondenaturing gels
use of RestrictionEnzyme digestion of ds cDNA, followed by ligation of an adapter to mediate selective PCR of the extreme 3' ends of the fragmented cDNAs
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